48T/96t 苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒
簡單介紹
48T/96t 苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒的詳細介紹
中文名:苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA 試劑盒
供應商:上海古朵
規格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個月
樣本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點:敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存,操作簡便。
用途:用于測定血清,血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
運輸方式:現貨供應,一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒 操作時注意事項:
1. Elisa試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔一孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
6.本試劑不同批號組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.底物請避光保存。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50?l。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l,然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50?l,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50?l,再加入顯色劑 B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50?l,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒 常見問題以及解決方法:
1、試劑的選擇:選擇優良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍;
2、加樣中可能遇到的問題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時候,會碰到血清血漿不好分離的情況,這個時候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時,然后在進行離心處理;
3、洗板時容易造成誤差: 因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時候洗干凈了也是人為判斷的,這個時候帶有主觀色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時候孔與孔之間的液體容易交叉流動;
4、顯色問題: 使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進行顯色反應的時候,要先查看顯色劑本身的情況;
5、終止反應:在加終止劑的時候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽性結果。所以在倒終止劑的時候要緩慢倒;
6、讀板:讀板的時候先應該保證板的清潔干凈;
7、嚴格按照說明書操作。
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