產品名稱：堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP比色法)規格：60T供應商:古朵生物分類：酶類檢測儲存條件:—20℃,避光,6個月產品用途：檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的堿性磷酸酯酶活性。。

產品名稱：堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP比色法)
規格：60T
供應商:古朵生物
分類：酶類檢測
儲存條件:—20℃,避光,6個月
產品用途：檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的堿性磷酸酯酶活性。。
注意事項：采用PNP比色法,其檢測原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物,在酸性條件下,以AMP為磷酸酰基的受體物質,可在堿性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在堿性條件下p-nitrophenol轉變成醌式結構,呈較深的黃色,產物黃色越深,說明堿性磷酸酶活性越高,反之則酶活性越低,通過分光光度比色法測定400～415nm處吸光度。
 
 
堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP比色法)檢測方法：微量法
測定意義：植物酚類物質具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有較高的營養價值和醫療保健作用而廣泛應用于化妝品、食品、醫藥等領域。
測定原理：在堿性條件下，酚類物質將鎢鉬酸還原，產生藍色化合物，在760nm處有特征吸收峰，測760nm處的吸光值，即可得樣品總酚含量。
需要的儀器，耗材:天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
 
 
堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP比色法)操作注意事項：
1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7）底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
 
堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP比色法)特點：
1.專一性強。抗原與抗體的免疫反應是專一反應，而免疫酶技術以免疫反應為基礎，所檢測的對象是抗原（或抗體），使用的抗體除標記了酶以外，與普通抗體的免疫反應特性并無多大差別。
2.靈敏度高。由于抗體聯結上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應，顯示抗原與抗體的結合，大大提高了檢測的靈敏性，使檢測水平接近放射免疫測定法。
3.樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定，因此有利于樣品的保存。
4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察，也可以用分光光度計進行比色測定，還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變，從而引起被檢測物的顯示。
5.可以定量測定。溶液中的抗原物質，應用酶免吸附技術進行比色測定，依據光密度值的變化，可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行免疫酶技術的定量測定。
6.可以大規模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測，免疫酶技術都能在較短時間內完成。
7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說，不需要熒光顯微鏡，也不需要測定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產應用單位均易購置.

 
 
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
 

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